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产品名称:

荧光定量检测试剂

产品型号: FT-ZWSJ
更新时间: 2019-09-24
描述:荧光定量检测试剂匹配非洲猪瘟检测仪,准确的检测非洲猪瘟病毒,适用于猪血液、猪肉组织、淋巴结、脾脏等样本中非洲猪瘟病毒核酸的检测。

产品介绍

荧光定量检测试剂【用法与判定

1用法

1.1样品处理及模板准备

1.1.1样品处理

·组织样品处理:分别从猪肉组织、淋巴结、脾脏不同位置取样,用手术剪剪碎混匀后取0.1g于研磨器中研磨,加入1.5ml生理盐水继续研磨,待匀浆后转至1.5ml无菌离心管,12000 r/min离心2分钟,取上清200μl备用。

·血液样品无需处理,取200μl备用。

1.1.2模板准备

·根据不同的样本类型,按照下表准备相应的样本用量。

·将样本加入到1.5 ml离心管中,加入下表推荐体积的Solution A,涡旋震荡20 s,并按照下表推荐的处理方法,室温静置3-5 min,或95℃金属浴振荡孵育3-5 min。

·样本充分裂解后(95℃金属浴振荡孵育的样本需恢复室温),加入下表推荐体积的Solution B,并涡旋震荡30 s,12000rpm离心2min,上清即为模板DNA。

·处理后的样本如在2小时内进行下一步试验,请于4℃保存,如不能立即进行下一步试验,请于-20℃保存。

样本类型

样本用量

Solution A

处理温度及时间

Solution B

全血

10μl

100μl

室温静置3-5min

100μl

唾液

100ul

100ul

室温静置3-5min

100μl

口腔拭子

1

400μl

95℃,3-5min

400μl

组织匀浆

10μl

100μl

室温静置3-5min

100μl

备注:组织样本加入10倍体积的生理盐水制成组织匀浆液后,可按照血液样本的处理方法进行处理。

1.1.3可利用商品化试剂盒提取核酸进行反应,效果更佳

1.2荧光PCR扩增

1.2.1试剂准备

实验前20分钟将试剂从冰箱取出并恢复至室温,使其完全融化,充分混匀后瞬时离心去除管壁吸附液体。

1.2.2配制反应体系

按下表1体系,在配套PCR管中配制反应体系,盖紧管盖后瞬时离心10秒,转移至扩增区。

表1 PCR反应体系

成分

体积

PCR反应液

18μl

预准备的模板(样本/对照)

2μl

总体积

20μl

1.2.3 PCR扩增

快速模式

表2仪器PCR扩增参数

阶段

温度

时间

循环数

1

95℃

30s

1

2

95℃

10 s

40

60℃

20 s(采集荧光信号)

FAM通道采集荧光信号,需要内参的话请同时打开HEX/VIC荧光通道

2判定

2.1合理调整阈值线,不同仪器可根据仪器噪音情况进行调整。

2.2试剂盒有效性判定

·阴性对照:无Ct值,线形为直线或微斜,无明显指数增长。

·阳性对照:Ct值≤30,有明显指数增长,呈典型的S型曲线。

2.3样本结果判定

·样本检测结果Ct值≤38,有明显指数增长,判定为阳性,表明样本中检测出非洲猪瘟病毒。

·样本检测结果38<Ct≤40,判定为可疑。应对样本进行复测,若复测结果Ct值仍在38~40之间,有明显指数增长,则判定为阳性,否则为阴性。

·样本检测结果无Ct值,判定为阴性,表明样本中未检测出非洲猪瘟病毒。

荧光定量检测试剂

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